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細(xì)胞流式檢測準(zhǔn)備（直接標(biāo)記一抗）
發(fā)表者：北京博奧森生物 發(fā)表時(shí)間：2016-2-15
熒光素直接標(biāo)記的一抗（直接免疫熒光法）
試劑準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備熒光標(biāo)記的一抗和同型對(duì)照抗體
2.細(xì)胞洗液：含有2%BSA（牛血清白蛋白）、0.1%疊氮鈉的PBS.
3.固定液：1%多聚甲醛PBS液（pH7.2）pH值一定要準(zhǔn)確，否則會(huì)影響檢測結(jié)果。
操作方法：
1.每個(gè)樣品取2支流式檢測管，分別注明同型對(duì)照和待測，兩管分別加入106-7/100μl個(gè)待側(cè)細(xì)胞（若細(xì)胞濃度低或加入的細(xì)胞懸液較多，可1200轉(zhuǎn)/每分鐘，10分鐘低溫離心，棄上清，保證100μl被檢樣品）。
2.同型對(duì)照管中加入熒光標(biāo)記同型對(duì)照抗體，做陰性對(duì)照；待測管中加入熒光標(biāo)記的一抗，作為實(shí)驗(yàn)管，各加30μl (按抗體使用說明書，一抗可做選擇幾個(gè)梯度1：20、50、100倍稀釋)混勻即可。
3. 4℃度孵育30分鐘，加入細(xì)胞洗液，1200轉(zhuǎn)/每分鐘，10分鐘低溫離心，反復(fù)2次。
4.去除上清，控干，加入固定液0.5ml,混勻。
5.上機(jī)檢測，先做同型對(duì)照，調(diào)整電壓至陰性區(qū)范圍，再測實(shí)驗(yàn)管即可。
